活性氧（Reactive Oxygen Species，ROS）是机体进行正常有氧代谢的产物，是由氧组成，含氧并且性质活泼的一类物质的总称。ROS水平是细胞正常生理功能和环境因素导致的细胞氧化损伤的重要标志，因此，检测细胞内ROS水平对于理解细胞信号转导和研究疾病潜在作用机制具有重要意义。

目前针对ROS的检测方法有荧光染色法、电子顺磁共振技术（EPR）、化学发光法、色谱法、分光光度法、电化学生物传感器和基于荧光蛋白等。

以荧光染色法为例，目前利用荧光染色法检测细胞内ROS最常用的是DCFH-DA荧光探针法。DCFH-DA（Dichlorofluorescein Diacetate，2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐）是一种可指示的探针，DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜。进入细胞后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH，而DCFH不能通过细胞膜，因此探针很容易积聚在细胞内。细胞内的ROS能够氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF，且绿色荧光的强度与ROS的水平成正比。在最大激发波长480nm，最大发射波长525nm处，使用荧光显微镜、流式细胞仪或激光共聚焦显微镜等检测荧光信号。

1、细胞复苏生长

2、弃上清，用PBS轻洗2次

3、加入胰酶消化，显微镜下观察，细胞变圆收缩

4、加入完全培养基，吹打均匀后转移到离心管中离心

5、弃上清，加入新鲜完全培养基，吹匀

6、取适量细胞悬液加入EP管中，计数

7、培养皿中铺入细胞，放入培养箱中培养24h

8、探针装载，用无血清培养基稀释DCFH-DA，在培养皿中加入稀释好的探针DCFH-DA工作

液，37℃放置30min

9、荧光显微镜观察并记录