细胞复苏生长

弃上清，用PBS轻洗2次

加入胰酶消化，显微镜下观察，细胞变圆收缩

加入完全培养基，吹打均匀，转移至离心管，离心

弃上清，加入新鲜完全培养基，吹匀

取适量细胞悬液加入EP管中，计数

将载玻片斜放入中皿利，在中皿里加入新鲜培养基，将细胞悬液滴在载玻片上，铺入细胞，放入培养箱中培养24h

取出玻片，用PBS洗1~2次，甲醇固定10~15min，用PBS洗3次，每次5min

免疫组化笔画圈

阻断内源性过氧化物酶，用羊血清封闭液封闭

玻片甩去多余封闭液体后，滴加一抗覆盖细胞，玻片平放于湿盒内，4℃孵育过夜，回收一抗，PBS洗3次，每次5min

玻片甩去多余PBS液体后，滴加二抗，孵育90min后回收二抗

DAB显色，苏木素复染，盐酸乙醇分化，氨水分化，自来水冲洗

脱水封片，荧光显微镜观察并记录