蛋白质印迹（WesternBlot）又称免疫印迹，是根据抗原抗体的特异性结合检测样品中的某种蛋白的方法。它利用特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色，通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。WesternBlot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术广泛应用于检测蛋白水平的表达。

1．试剂、设备准备

2．检漏：将去离子水用移液枪打入，水平面与玻璃板水平线齐平，5min内水平面未下降即检漏成功

3．用50ml离心管配分离胶，配好后用移液枪来回吹打混匀，沿玻璃板一角打入玻璃板内

4．封胶

5．用50ml离心管配基层胶，配好后用移液枪来回吹打混匀，沿玻璃板一角打入玻璃板内直到基层胶溢出来，将1.0mm加样梳正面对着透明玻璃板，并迅速插入基层胶内

6．电泳，转膜

7．封闭：将蛋白条带放入装有封闭液的塑料盒内，室温震荡2h

8．一抗孵育：用镊子将蛋白条带从封闭液中取出，并将条带倾斜，一角靠着滤纸贴侧吸干，放入孵育盒内，4℃孵育过夜

9．二抗孵育

10．显色：Western Blot显色的方法主要有放射自显影、底物化学发光ECL、底物荧光ECF、底物DAB呈色，目前常用的是底物化学发光ECL和底物DAB呈色